賽默飛StepOnePlus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀所需的耗材和試劑。總的來說，可以分為兩大部分：核心耗材（儀器運(yùn)行必需） 和 反應(yīng)試劑（實(shí)驗(yàn)成功必需）。

一、賽默飛StepOnePlus實(shí)時(shí)熒光定量PCR核心高耗材

1、反應(yīng)板

這是承載PCR反應(yīng)體系的容器，必須與儀器適配。

（1）96孔板：常用的規(guī)格，與StepOnePlus的標(biāo)準(zhǔn)模塊匹配。

推薦品牌：賽默飛原廠的 MicroAmp™ Fast 96-Well Reaction Plate (0.1 mL) 是選擇，光學(xué)性能良好。

其他兼容品牌：也可以選擇其他品牌的兼容96孔板，但必須確保是光學(xué)平蓋或光學(xué)凸蓋，并且材質(zhì)能承受快速升降溫。

（2）0.2 mL單管或八聯(lián)管

如果您需要更高的靈活性或通量不高，可以使用0.2 mL的單管或八聯(lián)管，并配合相應(yīng)的96孔板架。

推薦：賽默飛原廠的 MicroAmp™ 8-Tube Strips 和 MicroAmp™ Clear Adhesive Film。

2、封板膜

用于密封反應(yīng)板，防止樣品蒸發(fā)和交叉污染。至關(guān)重要，密封不嚴(yán)會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

（1）光學(xué)透明粘性封膜：常用的一種，適用于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)。

推薦：賽默飛原廠的 MicroAmp™ Optical Adhesive Film。

（2）熱封膜：使用專門的封膜機(jī)進(jìn)行熱封，密封效果好，但需要額外設(shè)備。

重要提示：StepOnePlus是一款塊狀基因擴(kuò)增儀，它不能使用平板式離心機(jī)進(jìn)行離心。如果需要對封膜后的板進(jìn)行離心，必須使用專為96孔板設(shè)計(jì)的掌上離心機(jī)。

二、反應(yīng)試劑

這部分是進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)本身所需的化學(xué)物質(zhì)。

1、核心反應(yīng)混合物

這是PCR反應(yīng)的主體，通常以2x預(yù)混液的形式提供，包含了DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等。

（1）SYBR Green法：如果您使用SYBR Green染料法進(jìn)行檢測。

推薦：賽默飛原廠的 PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix 性能非常出色。其他如 Power SYBR™ Green PCR Master Mix 也是經(jīng)典選擇。

（2）TaqMan探針法：如果您使用水解探針法進(jìn)行檢測。

推薦：賽默飛原廠的 TaqMan™ Fast Advanced Master Mix 或 Universal Master Mix II。

2、引物和探針

（1）SYBR Green法：需要針對您的目標(biāo)基因設(shè)計(jì)并合成特異性引物。

（2）TaqMan探針法：需要針對您的目標(biāo)基因設(shè)計(jì)并合成特異性引物和標(biāo)記了熒光基團(tuán)（如FAM）和淬滅基團(tuán)（如TAMRA/MGB）的探針。

3、模板DNA/cDNA

您要檢測的樣品，例如從細(xì)胞、組織中提取的基因組DNA，或由RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA。

4、無核酸酶水

用于稀釋和調(diào)整反應(yīng)體系體積。

三、總結(jié)清單

為了方便您準(zhǔn)備，這里是一個(gè)簡潔的清單：

1、核心耗材

96孔反應(yīng)板 (0.1 mL)：承載PCR反應(yīng)液，必須光學(xué)透明

光學(xué)透明粘性封膜：密封反應(yīng)板，防止蒸發(fā)和污染

(可選) 0.2 mL 八聯(lián)管 & 管架：提供更靈活的實(shí)驗(yàn)方案

2、反應(yīng)試劑

qPCR預(yù)混液 (2X Master Mix) ：PCR反應(yīng)核心組分，根據(jù)染料法或探針法選擇

引物 (Primers) ：特異性擴(kuò)增目標(biāo)片段

(探針法) 熒光探針：特異性檢測并報(bào)告目標(biāo)片段擴(kuò)增

模板DNA/cDNA：待檢測的樣品。