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Mini Trans-Blot® 電泳轉(zhuǎn)印槽的使用說(shuō)明書。這是一個(gè)經(jīng)典和常用的設(shè)備。可以為您整理一份詳細(xì)、準(zhǔn)確的操作步驟、關(guān)鍵注意事項(xiàng)和資源獲取指南,其內(nèi)容基于該設(shè)備的說(shuō)明書,能確保您安全正確地使用。
一、伯樂(lè)Mini Trans-Blot電泳轉(zhuǎn)印槽核心組件清單
1、緩沖液槽及帶有安全聯(lián)鎖插孔的槽蓋。
2、轉(zhuǎn)印夾:黑色面為陰極(-),透明/白色面為陽(yáng)極(+)。通常配1-2個(gè)。
3、海綿墊:厚約1cm,用于產(chǎn)生均勻壓力。
4、濾紙:與凝膠尺寸相近,用于傳導(dǎo)電流和緩沖液。
5、冰盒/冷卻芯(可選配件):用于轉(zhuǎn)印時(shí)降溫。
6、電源連接線。
二、伯樂(lè)Mini Trans-Blot電泳轉(zhuǎn)印槽轉(zhuǎn)印操作步驟(以轉(zhuǎn)印至PVDF膜為例)
1、組裝“三明治"
口訣:黑負(fù)白正,從黑到白
在盛有緩沖液的淺盤中進(jìn)行,確保所有組件浸濕并逐層排盡氣泡。
(1)打開(kāi)轉(zhuǎn)印夾,黑色(陰極)面朝下放置。
(2)在黑色夾板上依次平鋪:
1塊海綿墊
2層濾紙
(3)極性不能錯(cuò):牢記“黑對(duì)黑,白對(duì)紅"(轉(zhuǎn)印夾黑面對(duì)槽黑極,白面對(duì)紅極)。接反會(huì)導(dǎo)致蛋白被轉(zhuǎn)出膜外。
(4)膜的選擇與處理:PVDF膜必須用甲醇激活;NC膜親水,無(wú)需激活但機(jī)械強(qiáng)度較差。
(5)條帶扭曲/變形:通常是“三明治"組裝不平、海綿或?yàn)V紙老化、或冷卻不均導(dǎo)致。
(6)轉(zhuǎn)印效率低:
小分子量蛋白被轉(zhuǎn)穿:縮短轉(zhuǎn)印時(shí)間或降低電流。
大分子量蛋白轉(zhuǎn)印不干凈:延長(zhǎng)轉(zhuǎn)印時(shí)間,或在緩沖液中加入0.1% SDS 以提高滲透性。