伯樂(lè)Mini-PROTEAN® Tetra電泳槽（也稱為“四板電泳槽"）是一款非常經(jīng)典且常用的垂直電泳槽，適用于SDS-PAGE蛋白電泳。其核心特點(diǎn)是可同時(shí)運(yùn)行多達(dá)4塊小型膠（迷你膠），適合高通量篩選。以下是詳細(xì)的操作方法和步驟指南：

一、伯樂(lè)Mini-PROTEAN® Tetra電泳槽實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1、試劑與材料：

電泳槽主體（包括上槽、下槽、綠色電極蓋、夾子、紅/黑電極線）

玻璃板、短板、1.0/1.5mm厚墊片、梳子

制膠架和制膠框

配制好的分離膠和濃縮膠溶液

電泳緩沖液（如1x Tris-Glycine-SDS緩沖液）

蛋白樣品、上樣緩沖液、Marker

移液器及上樣吸頭

電源

2、安全：佩戴手套和護(hù)目鏡。

二、伯樂(lè)Mini-PROTEAN® Tetra電泳槽灌膠與制膠

1、組裝制膠三明治：

（1）將短板（短板） 和帶綠邊的長(zhǎng)板分別與相應(yīng)厚度的墊片對(duì)齊。

（2）將短板（內(nèi)板）放入制膠架的卡槽內(nèi)，光滑面朝前。

（3）將長(zhǎng)板（外板，綠邊朝上）壓在短板和墊片上，形成“三明治"。確保底部對(duì)齊。

（4）將整個(gè)“三明治"卡進(jìn)制膠架的彈簧夾中，鎖緊。可以同時(shí)制作多個(gè)。

2、灌制分離膠：

（1）按照配方配制分離膠，混勻后迅速用移液器或加樣槍沿玻璃板一角灌入，避免產(chǎn)生氣泡。

（2）灌至適當(dāng)高度（通常為玻璃板的2/3至3/4處）。

（3）立即在膠面上輕輕覆蓋一層去離子水、異丙醇或水飽和正丁醇，以壓平膠面并隔絕空氣。

（4）靜置15-30分鐘，待分離膠凝固（可見清晰折光線）。

3、灌制濃縮膠：

（1）倒掉上層封膠液體，用濾紙吸干殘留液滴。

（2）配制濃縮膠，混勻后灌滿剩余空間。

（3）立即插入合適的梳子，避免產(chǎn)生氣泡。

（4）靜置15-20分鐘，待濃縮膠凝固。

三、電泳槽組裝與上樣

1、安裝膠塊：

（1）膠凝固后，從制膠架上取下膠“三明治"。

（2）打開電泳槽的上槽（緩沖液槽） ，將其內(nèi)側(cè)向下放置。

（3）將膠“三明治"的短板（內(nèi)板）面向內(nèi)側(cè)，綠邊緊貼上槽的橡膠墊，卡入上槽的卡槽中。

（4）每塊膠的兩側(cè)分別用夾子夾緊固定。可安裝1-4塊膠。

（5）將裝好膠的上槽放入下槽（接地槽） 中。

2、加入電泳緩沖液：

（1）在下槽中加入足量的電泳緩沖液，液面應(yīng)達(dá)到或略超過(guò)上槽底部的金屬絲。

（2）在上槽中加入電泳緩沖液，液面應(yīng)超過(guò)上槽的矮邊。

3、拔梳與上樣：

（1）雙手垂直向上輕輕拔出梳子。

（2）用微量移液器吸取蛋白樣品和Marker，穿過(guò)上槽緩沖液，小心加入加樣孔底部。避免交叉污染和溢出。

四、電泳運(yùn)行

1、連接電源：

（1）蓋上綠色電極蓋，確保蓋子上的電極與上槽的電極接觸良好。

（2）將電極蓋上的紅色插頭（正極，對(duì)應(yīng)上槽） 和黑色插頭（負(fù)極，對(duì)應(yīng)下槽） 分別連接到電泳電源的對(duì)應(yīng)輸出口。

（3）注意：紅色對(duì)紅色，黑色對(duì)黑色。電流方向是從上槽（負(fù)極，黑色）流向下槽（正極，紅色），蛋白帶負(fù)電向下遷移。

2、設(shè)置電泳參數(shù)并運(yùn)行：

（1）打開電源。

（2）設(shè)置電泳條件。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)SDS-PAGE，通常采用：

（3）恒壓模式：初始濃縮階段80-100V，待樣品進(jìn)入分離膠并看到Marker條帶分開后，提高至120-150V。

（4）恒壓模式：直接120V，約60-90分鐘跑完。

（5）恒流模式：如20-30mA/膠，適用于多塊膠同時(shí)運(yùn)行。

五、電泳后處理

1、關(guān)閉電源，拔掉電極線。

2、拆卸：倒掉或回收電泳緩沖液。取下夾子，小心撬開玻璃板，取出凝膠。

3、下游應(yīng)用：將凝膠進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色、銀染或 Western Blot 轉(zhuǎn)膜。

六、關(guān)鍵注意事項(xiàng)與技巧

1、防漏：確保玻璃板潔凈，墊片放正，夾子夾緊，是防止灌膠和電泳時(shí)漏液的關(guān)鍵。

2、氣泡：灌膠和插梳時(shí)避免產(chǎn)生氣泡，否則會(huì)影響加樣孔形狀和電泳條帶。

3、方向與電極：務(wù)必記住短板在內(nèi)側(cè)，綠邊朝上。電極連接錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致樣品跑出膠外。

4、緩沖液量：下槽緩沖液一定要沒(méi)過(guò)上槽底部的金屬絲，否則電路不通。

5、清潔：使用后用去離子水清洗所有部件，特別是電極和橡膠墊處，防止鹽結(jié)晶腐蝕。

6、安全：在接通電源或槽內(nèi)有緩沖液時(shí)，不要觸碰電極或緩沖液，以防觸電。